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小鼠Elisa試劑盒操作流程標準化,新手也能輕松上手

更新時間:2025-06-13      瀏覽次數:14
在生命科學研究中,小鼠作為一種重要的實驗動物模型,其體內各種生物分子的檢測對于揭示疾病機制、評估藥物效果以及研究生理過程具有重要意義。小鼠ELISA試劑盒作為一種高效、靈敏的檢測工具,廣泛應用于小鼠樣本中特定抗原、抗體或生物分子的定量分析。

一、小鼠ELISA試劑盒的功能與原理

小鼠ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒基于抗原抗體特異性結合的原理,通過酶促反應實現對目標分子的定量檢測。其核心原理是利用特異性抗體包被在酶標板上,當樣本中的目標分子與包被抗體結合后,再加入酶標記的二抗,形成“抗體-抗原-酶標記抗體”的夾心復合物。通過加入顯色底物,酶促反應產生的顏色變化可以通過酶標儀在特定波長下檢測,從而實現對目標分子的定量分析。

例如,Elabscience推出的微量法小鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒,采用雙抗體夾心法,檢測范圍為15.63-1000 pg/mL,靈敏度低至9.38 pg/mL,能夠精準檢測小鼠樣本中的IL-18。這種試劑盒的檢測原理是利用抗小鼠IL-18抗體包被酶標板,樣本中的IL-18與包被抗體結合后,加入生物素化的抗小鼠IL-18抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素,最終通過顯色反應實現定量檢測。

二、小鼠ELISA試劑盒的用途:

1.炎癥與免疫研究

可用于檢測炎癥相關細胞因子,如白介素(IL)系列、腫瘤壞死因子(TNF)等。例如,IL-18在自身免疫性疾病(如類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡)和感染性炎癥(如細菌、病毒感染引發的炎癥反應)研究中具有關鍵作用。通過檢測這些細胞因子的水平,研究人員可以探討炎癥發生發展的機制及評估治療效果。

2.代謝性疾病研究

在肥胖、糖尿病等代謝性疾病中,某些細胞因子(如IL-18)參與調節脂肪細胞代謝和胰島素抵抗過程。可幫助研究人員深入研究代謝性疾病與免疫炎癥的關聯。

3.腫瘤研究

細胞因子在腫瘤免疫監視和腫瘤微環境調控中發揮重要作用。例如,IL-17A在腫瘤發生發展機制和免疫治療效果評估中具有重要價值。可用于檢測腫瘤組織或血清中的相關細胞因子,為腫瘤免疫治療策略的開發提供依據。

4.藥物研發

在新藥研發過程中,可用于檢測動物模型中藥物對特定生物分子表達水平的影響,為藥物的抗炎、免疫調節等作用機制研究提供數據支持。

三、小鼠ELISA試劑盒的使用方法:

1.試劑準備

所有試劑需在使用前恢復至室溫。例如,濃縮洗滌液需按1:20比例與蒸餾水稀釋,底物液A和B使用前按1:1體積充分混合。

2.樣本處理

根據試劑盒說明書的要求,對樣本進行處理。例如,血清、血漿或細胞培養上清等樣本需按照指定體積加入到酶標板中。

3.操作步驟

-設置標準品孔、樣本孔和空白孔,分別加入相應液體。

-除空白孔外,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體,用封板膜蓋住反應板,37°C孵育。

-洗板5次,確保移除殘留液體。

-加入底物混合液,37°C孵育后加入終止液。

-在450nm波長處用酶標儀讀取各孔吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣本中目標分子的濃度。

四、小鼠ELISA試劑盒的優勢:

-高靈敏度:能夠檢測低豐度的目標分子,例如,某些試劑盒的檢測限可達15.6 pg/mL。

-高特異性:采用高特異性抗體對,與其他細胞因子交叉反應極低。

-微量樣本需求:部分試劑盒僅需25-50μL樣本,適合珍貴樣本或微量樣本檢測。

-操作簡便:配套試劑齊全,操作流程標準化,新手也能輕松上手。

-快速檢測:從樣本處理到結果讀取,通常僅需3.5-4小時。 
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